Purification de nanoparticules de protéines auto-assemblées à l’aide de la chromatographie d’affinité

Abstract

Source : Karch, C. P. et al., Production de nanoparticules de protéines auto-assemblées exprimées par E. coli pour les vaccins nécessitant une présentation d’épitope trimérique.J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo présente la purification de nanoparticules de protéines auto-assemblées ou SAPN marquées à l’histidine à l’aide de la chromatographie liquide d’affinité. Les fractions SAPN purifiées qui en résultent conviennent au développement de vaccins, ce qui est prometteur pour des applications immunothérapeutiques potentielles.

Protocol

1. Expression du noyau de nanoparticules de protéines auto-assemblées contenant un faisceau à six hélices (SHB-SAPN) protéine chez E. coli BL21(DE3)

1. Mélanger 95 mL du composant A et 5 mL du composant B du milieu dans un erlenmeyer en verre stérile de 2 L selon les instructions du fabricant (voir le tableau des matières). Ajouter de l’ampicilline à une concentration finale de 100 μg/mL.
2. Inoculer le milieu avec E. coli à partir d’une culture mère de glycérol préalablement établie. Incubation de la culture à 30 °C avec agitation à 200 rotations par minute (tr/min) pendant 48 h
   REMARQ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
2-propanol	pêcheur	BP26181	4 L
Ampicilline	pêcheur	Réf. BP1760-25	25 grammes
Systèmes de filtration/stockage sous vide jetables Corning	pêcheur	Tél. : 09-761-108	Une variété de tailles
GE Healthcare 5 mL HisTrap HP Colonnes préemballées	GE Soins de santé	Tél. : 45-000-325	Paquet de 5
glycérol	pêcheur	BP229-4	4 L
Imidazole	pêcheur	Réf. O3196-500	500 grammes
Magic Media E. coli Milieu d’expression	ThermoFisher	K6803	1 L
MilliporeSeringue stérile Sigma Millex 0,22 mm Filtres	Millipore	SLGV033RB	Paquet de 250
One Shot BL21 Star (DE3) E. coli chimiquement compétent	ThermoFisher	C601003	20 flacons
Phosphate de sodium monobasique	pêcheur	Réf. BP329-500	500 grammes
Base Tris	pêcheur	BP152-1	1 kg
urée	pêcheur	BP169-500	2,5 kg
équipement
Fiberlite F14-14 x 50CY Rotor à angle fixe	ThermoFisher	Référence 096-145075	rotor
Système de chromatographie NGC Quest 10	BioRad	7880001	FPLC pour aider à la purification des protéines
Sonifer 450	Branson	Aussi connu sous le nom de 096-145075	Sonicateur